Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) относится к наиболее распространенным типам хронического повреждения печени во многих странах [1]. НАЖБП – сложное метаболическое состояние, при котором как образ жизни, так и генетическая составляющая являются патогенными факторами. В патогенезе заболевания важную роль играют окислительный стресс, цитокины, ожирение и резистентность к инсулину. НАЖБП регистрируется у 60–95% лиц с ожирением [2]. Висцеральный жир является ключевым медиатором неалкогольного стеатогепатита (НАСГ) и тесно связан с уровнем аминотрансфераз в недиабетической популяции с ожирением [3]. Адипонектин обеспечивает критическую связь между накоплением висцерального жира и резистентностью к инсулину [4].
Адипонектин, также известный как ACRP30 (белок, связанный с комплементом адипоцитов, с молекулярной массой 30 кДа), GBP28 (желатин-связывающий белок 28), ADIPOQ (адипонектин, содержащий C1Q и коллагеновый домен) и APM1 (самый распространенный транскрипт гена 1 в адипозной ткани), продуцируемый белой жировой тканью, был обнаружен почти одновременно четырьмя разными командами исследователей с помощью разных подходов. В гене описано много однонуклеотидных полиморфизмов (SNPs), которые во многих популяциях показали ассоциацию с уровнем адипонектина и/или метаболическим синдромом (МС). Однако результаты исследований часто носят противоречивый характер [5]. Так, выявлена связь полиморфных локусов гена ADIPOQ с сахарным диабетом (СД) 2-го типа, ожирением, НАЖБП, МС, сердечно-сосудистыми заболеваниями, синдромом поликистоза яичников, периодонтитом, остеоартритом колена, протоковым инфильтрирующим раком молочной железы [6].
Показано, что полиморфный вариант однонуклеотидной замены rs2241766 гена ADIPOQ, а также rs266729 и rs822395 имеют значимую ассоциацию с СД 2-го типа [7]. Более того, полиморфизм rs2241766 тесно связан не только с СД 2-го типа, но также с ожирением и МС [8].
Семейные исследования варианта rs266729 в промоторной области ADIPOQ показали ассоциацию с ожирением в нескольких популяциях, в том числе арабской [9]. В то же время имеются работы, свидетельствующие об отсутствии значимой ассоциации полиморфизма rs2241766 с ожирением, MС или гипертензией [10]. Противоречивость результатов исследований отмечается и в отношении полиморфного маркерного локуса rs266729. Так, в некоторых исследованиях установлено, что G-аллель локуса rs266729 является вероятным фактором риска возникновения СД 2-го типа [11]. Однако P. Li и соавт. не обнаружили существенной ассоциации между полиморфизмом rs266729 и МС [8]. Как показал метаанализ большого количества исследований в китайской популяции, G-аллель полиморфного локуса rs2241766 значительно увеличивает риск МС [12]. Более того, ученые схожи во мнении, что необходимо проведение более широкого исследования с вовлечением больших выборок представителей различных этнических групп для выявления ассоциации между полиморфизмами rs2241766 и rs266729 гена ADIPOQ и МС [11]. В связи с продолжающимся ростом распространенности НАЖБП в мире, в том числе Узбекистане, генетический полиморфизм гена ADIPOQ стал предметом исследований [13].
Целью настоящего исследования стало изучение распространенности аллелей и генотипов полиморфизма c.276G>T (rs1501299) гена ADIPOQ у лиц узбекской национальности с НАЖБП.
Материал и методы
В исследование было включено 143 пациента узбекской национальности: 94 больных НАЖБП в возрасте от 22 до 60 лет и 49 добровольцев без метаболических заболеваний в анамнезе, отсутствием приема алкоголя (не более 30 г в день у мужчин и 20 г у женщин) и нормальными биохимическими показателями. Молекулярно-генетические исследования проводили в Центре передовых технологий при Министерстве инновационного развития. Типирование образцов ДНК по c.276G>T (rs1501299) гена ADIPOQ проводили с использованием специфических олигонуклеотидных праймеров с участками гена ADIPOQ. После проведения стандартной амплификации гена методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) полученные ПЦР-продукты подвергались ПДРФ-анализу (полиморфизм длин рестрикционных фрагментов) с использованием эндонуклеазы рестрикции Pct I (фермент) (производство НПО «Сибэнзим»). При генотипировании продуктов ПДРФ-анализа (рестрикционные продукты) c.276G>T (rs1501299) гена ADIPOQ наличие одного фрагмента весом 468 bp (п.н.) говорило о том, что данный образец – носитель гомозиготного генотипа TT, наличие трех фрагментов весом 468, 320 и 148 bp (п.н.) свидетельствовало о гетерозиготном генотипе GT, а наличие двух фрагментов весом 320 и 148 bp (п.н.) – гомозиготном генотипе GG (рисунок).
Результаты и обсуждение
В результате генотипирования выявлено следующее распределение генотипов и аллелей полиморфного маркера c.276G>T (rs1501299) гена ADIPOQ: генотип GG определен у 21 (22,3%) больного, генотип GT – у 53 (56,4%) пациентов, TT – у 20 (21,3%) больных (χ2 = 5,36; p = 0,006).
Анализ распределения аллелей не показал существенного доминирования носительства G-аллеля по сравнению с T-аллелем у больных НАЖБП узбекской национальности: G-аллель – 95 (50,5%) случаев, T-аллель – 93 (49,5%) случая (χ2 = 3,56; df = 1, p = 0,059).
Иные результаты были получены у здоровых лиц (n = 49): соотношение генотипов GG : GT : TT – 55,1 : 30,6 : 14,3% (χ2 = 10,28; df = 2; р = 0,0001), частота аллелей G и T – 70,4% (n = 69) и 29,6% (n = 29) соответственно (χ2 = 6,84; df = 1, р = 0,001).
Сравнительный анализ аллелей в двух группах показал, что в контрольной значительно преобладали GG-генотип и G-аллель (χ2 = 10,4; df = 1; р = 0,001). Общее распределение частот генотипов в популяции соответствовало теоретически ожидаемому расчету частот генотипов по Харди – Вайнбергу (χ2 = 0,11; p > 0,05) (табл. 1).
Установлено, что частота минорного аллеля в узбекской популяции в целом составляет 42% и значительно превышает аналогичный показатель во вьетнамской, британской, эстонской, шведской, европейской и американской популяциях (24,9, 25,1, 28,2, 28,5, 28 и 30% соответственно). В то же время частота минорного аллеля в узбекской популяции близка к этому показателю в популяции Хан (Китай), Йоруба (Западная Африка) и Африки в целом (33, 38 и 39% соответственно).
Распределение частоты аллелей и генотипов в контрольной группе имело тенденцию к отклонению от ожидаемого расчета частоты генотипов по Харди – Вайнбергу, особенно по генотипам GT и TT (χ2 = 3,45; p = 0,06) (табл. 2).
Распределение частоты аллелей и генотипов у больных соответствовало теоретически ожидаемому расчету частоты генотипов по Харди – Вайнбергу (табл. 3).
Сравнительный анализ двух групп (случай/контроль) с использованием одностороннего дисперсионного анализа ANOVA показал достоверное различие в генетическом статусе пациентов в зависимости от наличия или отсутствия диагноза НАЖБП (F = 15,2; p = 0,0001). Эти данные были проверены с помощью апостериорного анализа Краскела – Уоллиса, к ним была применена поправка Бонферрони для исключения ложноположительного результата (ошибка первого типа).
Сравнительный анализ общей модели наследования выявил существенное различие в распределении частоты генотипов между больными НАЖБП и здоровыми лицами (табл. 4). Кроме того, отмечалось существенное превалирование (56,4 против 30,6%) гетерозиготного (GT) генотипа по маркерному локусу c.276G>T (rs1501299) гена ADIPOQ у больных НАЖБП (p < 0,001; относительный риск (ОР) 2,93; 95%-ный доверительный интервал (ДИ) 41–6,09) и несущественное (21,3 против 14,3%) доминирование TT-генотипа (ОР 1,62; 95% ДИ 0,63–4,15).
Таким образом, у пациентов узбекской национальности с НАЖБП отмечалось накопление GT-гетерозиготного состояния, в то время как у здоровых лиц выявлено преобладание GG-гомозиготного генотипа с большой частотой G-аллеля.
Изучение генетических моделей и отношения шансов развития НАЖБП у носителей определенной комбинации аллелей и генотипов показало, что для мультипликативной модели существует достоверная связь T-аллеля с риском развития НАЖБП (p < 0,001; ОР = 2,33; 95% ДИ 1,39–3,92). Иными словами, наличие T-аллеля в 2,3 раза увеличивает риск развития НАЖБП у лиц узбекской национальности. В группе здоровых добровольцев значительно преобладают носители GG-генотипа по сравнению с группой больных (χ2 = 10,4; df = 1, р = 0,001).
Выводы
Во-первых, у пациентов узбекской национальности с НАЖБП отмечается накопление GT-гетерозиготного состояния по полиморфному локусу c.276G>T (rs1501299) гена ADIPOQ.
Во-вторых, выявлена достоверная связь аллеля c.276T (rs1501299) гена ADIPOQ с риском развития заболевания.
В-третьих, полученные результаты позволяют прогнозировать риск развития НАЖБП у лиц узбекской национальности.
Уважаемый посетитель uMEDp!
Уведомляем Вас о том, что здесь содержится информация, предназначенная исключительно для специалистов здравоохранения.
Если Вы не являетесь специалистом здравоохранения, администрация не несет ответственности за возможные отрицательные последствия, возникшие в результате самостоятельного использования Вами информации с портала без предварительной консультации с врачом.
Нажимая на кнопку «Войти», Вы подтверждаете, что являетесь врачом или студентом медицинского вуза.